Genotipificación y análisis filogenético de cepas colombianas del virus Dengue Tipo 2 / Genotyfication and philogenetics analysis of Colombian isolated, the Dengue Virus Type 2

El virus del Dengue, un flavivirus transmitido por mosquitos del género Aedes, es responsable de un creciente problema de salud pública en áreas tropicales de todo el mundo, con más de 3.000 millones de personas en riesgo de infección. Este virus produce un espectro de síntomas que varía desde un malestar semejante al resfriado común, conocido como dengue clásico, hasta una enfermedad que puede ser fulminante denominada ®dengue hemorrágico¼. La caracterización genética de los diferentes serotipos del virus permite no sólo entender los patrones epidémicos de distribución sino, además, demostrar la presencia de cepas hemorragíparas específicas como responsables de los casos más severos de la enfermedad. En este trabajo determinamos los ancestros evolutivos de los virus Dengue tipo 2 que han circulado en Colombia antes y después de la aparición del dengue hemorrágico a finales de 1989, mediante la secuenciación y análisis de un fragmento de 240 pb de la región de unión de los genes E/NS1 del virus; así, con las secuencias obtenidas de 5 cepas aisladas antes de 1989 y 10 identificadas en años posteriores, se construyó un árbol filogenético que sugiere la presencia de 2 genotipos diferentes en nuestro medio; la comparación con cepas aisladas de diferentes partes del mundo demuestra que uno de estos genotipos corresponde a cepas nativas americanas aisladas antes de la aparición del dengue hemorrágico, mientras que los virus encontrados posteriormente pertenecen al genotipo asiático, indicando el posible desplazamiento de las cepas autóctonas por genotipos posiblemente más agresivos.

Detección molecular del virus de la fiebre amarilla en muestras de suero de casos fatales humanos y en cerebros de ratón / Molecular detection of yellow fever virus in human sera and mice brains

Hemos adaptado un método molecular basado en la técnica de transcripción reversa seguida de la reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) para diagnóstico alternativo de la infección por el virus de la fiebre amarilla. Se tomaron tres sueros liofilizados de casos fatales de fiebre amarilla y cuatro sueros frescos, de los cuales tres pertenecían a casos fatales de la enfermedad y el cuarto a un paciente sintomático con serología IgM positiva para fiebre amarilla; los sueros fueron tratados con Trizol-LS( para extraer el ARN viral que fue sometido a reacción de RT y posteriormente a PCR, para la cual se diseñaron dos parejas de iniciadores específicos de fiebre amarilla: iniciadores directos (sentido) JM2104 (5ï-CGTTGGGAGAGGAGATTC-3ï) y JM2249 (5ï-TTCTTCACTTCGGTTGGG-3ï), e iniciadores inversos (antisentido) JM2673 (5ï-TCATCTGCCCTGCTTCTC-3ï) y JM2751 (5ï-CCTCTCTGGTAAACATTCT-3ï). La aplicación de la técnica en tejidos se hizo en cerebros de ratón infectados con el virus amarílico, tratados con una solución de lisis antes de purificar el ARN. En geles de agarosa se observaron bandas únicas de amplificación del tamaño esperado (569 pb y 502 pb); todas las muestras fueron corroboradas con las dos parejas de iniciadores y en dos de las muestras de suero fresco los resultados positivos para fiebre amarilla fueron comprobados con estudio histopatológico. Este método de detección molecular permitió demostrar de manera r pida y eficiente la presencia del virus de la fiebre amarilla, hecho que tiene importantes implicaciones diagnósticas para este problema de salud pública.

Demostracion del virus de la encefalitis equina venezolana tipo enzootico en la hemolinfa de mosquitos Psorophora confinnis infectados por via oral / Demonstration of Venezuelan equine encephalitis virus: enzootic type in the haemolymph of the Psorophora confinnis mosquitoes infected by mouth

Se llevo a cabo un experimento con el proposito de determinar si en mosquitos Psorophora confinnis (Arribalzaga, 1.891) infectados por via oral con una cepa exootica de Encefalitis Equina Venezolana era posible detectar el virus en la hemolinfa de estos mosquitos. El virus se pudo demostrar en la hemolinfa a las 24 horas post-infeccion en el 66.6% de los mosquitos, en el 75% de los mosquitos a los 2 y 9 dias post-infeccion y en el 100% de los mosquitos a los 6, 7, 8, 10, 11, 12 y 13 dia post-infeccion. Todos los mosquitos en los cuales se demostro virus en la hemolinfa fueron probados para intento de aislamiento de virus en el mosquito total y hubo una perfecta correlacion entre las dos. Los mosquitos que fueron negativos para virus en la hemolinfa tambien lo fueron cuando se probaron como mosquito total. En algunas hembras tomadas al azar se hizo una comparacion de los titulos del virus en la hemolinfa y en el mosquito total y no se encontro una diferencia significativa